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色谱峰分叉的八大原因

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威风的奥特曼。VIP会员 年费VIP会员 发表于 2022-1-16 08:05:04 | 显示全部楼层 |阅读模式   来自山东省
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1、色谱柱污染

在开始时没问题,在使用一段时间后出现这个问题,可能是由于污染引起的。这时需要对色谱柱加强冲洗,即使用比方法流动相更强的溶剂冲洗色谱柱。图1中使用纯乙腈冲洗色谱柱消除了3号峰分叉问题。
2、保护柱失效

如果样品基质比较脏,使用一段时间之后,发现的峰分叉或拖尾等问题,很有可能是保护柱失效造成的。一般粗略判断标准,塔板数、压力或分离度的改变超过 10%,就需要更换保护柱了。保护柱是消耗品,建议直接更换,不需要再生。


3、接头连接不正确

如果色谱柱在使用过程中发现每个峰的峰形都出现问题,先考察是否有连接问题。
管线可能太长或太短——这种情况可能导致渗漏或峰分叉/拖尾,如图2所示。如果管线太长,密封圈位置不当,将发生渗漏。如果管线推出的距离不够,将会产生一段死空间,形成混合腔,导致柱外体积,使峰形变坏。如果您使用的是不同厂商的色谱柱,一定要确保使用正确的接头,并保证色谱柱末端接头位置正确。
4、溶剂效应

在反相 LC 中, 如使用 100% 有机溶剂或 100% 强溶剂(图4中为乙腈),大体积进样时,将使色谱峰过早洗脱出色谱柱,导致峰变形。如需解决这个问题可以对分析物进行蒸发浓缩,从而减少进样体积。或者进样溶剂改为用水稀释,与流动相更为兼容,即使进样体积较大也不会出现峰变形。较早流出的峰或靠近溶剂前沿的峰更容易出现拖尾。在液相色谱中用溶于流动相的小体积进样最为理想。
5、样品过载

当进样量超过柱子的容量,样品峰会呈现分叉或拖尾,解决方案就是减少进样量。这种问题一般在使用小体积色谱柱是表现更为明显,所以色谱柱方法从常规250mm或150mm长色谱柱转化到体积较小的快速分析柱时,进样量要按照柱体积的减小的比例而减小。


6、色谱柱塌陷

由于柱塌陷引起的峰分叉,很难修复。如果流动相pH>7或在色谱柱pH耐受范围临界点附近长时间使用,是比较容易造成硅胶填料溶解塌陷。如果出现色谱柱塌陷,您会看到色谱图中的每个峰峰形都会发生变化(峰拖尾、加宽或分叉)如图5,短时间内可以反方向运行,建议直接更换色谱柱。日常使用的过程中注意将温度降低到 40 ℃以下,特别是使用高 pH 流动相时;使用高温兼容色谱柱,如立体保护的硅胶柱、混合型柱、聚合物柱、氧化锆柱等。使用特别适合在较高 pH 下操作的高覆盖率或双交联固定相(比如,ZORBAX Extend-C18),或使用聚合物、混合型或氧化锆反相柱。
7、柱前筛板部分堵塞

长期分析脏样品,如果没有保护柱或在线柱前过滤器,颗粒物和强吸附物很可能在柱入口筛板发生堵塞,同时伴随着压力升高,解决办法一般是色谱柱反冲。1.8um粒径的色谱柱尽量避免反冲。由于现在使用的是高效装柱工艺,不建议更换色谱柱入口筛板,在许多色谱柱上也不可能更换。如果更换筛板,可能影响柱效。所以最好在色谱柱前安装在线过滤器(部件号5067-4638)和保护柱。


8、色谱柱性能下降

在您使用色谱柱时,会用其分析各种目标物、使用各种流动相并分离不同的样品基质,经过长时间的使用,色谱柱会受到这些物质的影响发生一些微妙的变化,从而引起峰分叉、拖尾或保留时间的改变。在使用新色谱柱时保留其测试样品色谱图非常重要,在使用一段时间后进行比较,就能发现性能上的变化。如果分离度下降导致不能进行良好定量,这根色谱柱就应该丢弃并更换了。

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等候者VIP会员 VIP会员 发表于 2022-1-16 08:54:53 | 显示全部楼层   来自山东省
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Peterpaul彼得保罗
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中原人VIP会员 VIP会员 发表于 2022-1-16 09:58:27 | 显示全部楼层   来自辽宁省
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fengrm 发表于 2022-1-16 17:38:40 | 显示全部楼层   来自上海市
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qugdVIP会员 VIP会员 发表于 2022-1-18 09:01:59 | 显示全部楼层   来自北京市
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本帖最后由 qugd 于 2022-1-18 09:03 编辑

这种转的帖子,如果抛开原来所限定的是何种色谱、哪类色谱柱,基本就是废话,技术水平低得很。

整天在论坛中转帖,好玩么?

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您是高手,觉得技术水平低的很,只要有人觉得能了解到东西,我认为就可以。  详情 回复 发表于 2022-1-18 09:06
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威风的奥特曼。楼主 VIP会员 年费VIP会员 发表于 2022-1-18 09:06:35 | 显示全部楼层   来自山东省
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qugd 发表于 2022-1-18 09:01
这种转的帖子,如果抛开原来所限定的是何种色谱、哪类色谱柱,基本就是废话,技术水平低得很。

整天在论 ...

您是高手,觉得技术水平低的很,只要有人觉得能了解到东西,我认为就可以。

点评

看看总体帖子的质量,明眼人即可知晓。您为其他发问题的帖子有多少实质性解释,说说看? 您是技术引导版主,当要自己知道自己的职责。  详情 回复 发表于 2022-1-18 09:09
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qugdVIP会员 VIP会员 发表于 2022-1-18 09:09:50 | 显示全部楼层   来自北京市
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威风的奥特曼。 发表于 2022-1-18 09:06
您是高手,觉得技术水平低的很,只要有人觉得能了解到东西,我认为就可以。

看看总体帖子的质量,明眼人即可知晓。您为其他发问题的帖子有多少实质性解释,说说看?

您是技术引导版主,当要自己知道自己的职责。
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shisandongVIP会员 VIP会员 发表于 2022-2-8 17:00:33 | 显示全部楼层   来自河北省
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陆小果VIP会员 VIP会员 发表于 2022-4-13 19:07:40 | 显示全部楼层   来自河北省
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