分析师们，你们的色谱峰积分正确吗？

1. 背景介绍

       随着制药行业知识的迭代更新，监管机构在审计时，对药企的各方面要求越来越严格，尤其针对质量控制实验的数据完整性，俗话说打铁需要自身硬，所以我们需要时刻补充我们的知识，使我们的体系能够满足当下的要求，并顺利通过每一次审计。基于目前情况，相较于含量以及其他单个组分检测来说，有关物质的正确合理积分的难度更大，并且当前的审评对产品中有关物质的研究非常重视，也是必查内容，所以本文主要针对有关物质的正确合理积分进行讨论。

2. 色谱图积分的影响

       有关物质方法研究的杂质需要结合各国药典、原料药工艺和制剂工艺，数目也越来越多，十几个杂质都是非常常见的情况，这对色谱图的合理积分已然是一个不小的挑战，但为保证各个杂质之间能够有效分离，通常会采用梯度洗脱方式，而梯度洗脱方法的基线通常会存在上下波动以及杂质和梯度洗脱峰相近的情况，再次加大了色谱图合理积分的难度，如果等度洗脱，则可能存在洗脱时间长，保留时间较大的色谱峰展宽严重，容易导致积分不会。如果积分存在不合理的话，轻则对检测的结果会造成影响，重则可能会误判产品的质量情况，这将是非常危险的事情。

3. 正确合理的积分

       正确合理的积分，需要在合适的标尺下进行，例如图1，标尺设置的过大，我们并不能观察到积分是否合理，如果我们将标尺放大后，图2，我们可以观察到主峰中含有一个杂质峰，但错误的和主峰积分为一个峰而被遗漏，还有两个峰的积分的落点落在了色谱峰上，这两种的积分方式都会导致检测到的杂质偏小或未检测到杂质，而这种情形是最危险的，可能存在杂质超标的风险。

图1 不合适的标尺下，不能显示出积分的合理性

图2 将标尺放大后，发现存在漏积分杂质，以及积分不合理的情况。

       如何正确合理的进行疾风，参考PDA第80号技术报告《制药实验室数据完整性管理体系》，分别对正常峰，“M”型峰以及“h”型峰的合理的积分方式和不合理的积分方式给出了图示，见图3。

图3 PDA TR80中列举的不合理和合理积分

     相对而言，PDA TR80报告中给出的举例比较简单，如果是如图4的情况，我们如何进行合理的积分？

图4 含杂质较多的样品色谱图

       虽然图4中的杂质非常多，但是要正确合理的积分，那么把所有的峰都按照正确的积分方式积分上就是合理吗？其实不然，因为有些方法的灵敏度相对较高，检测能力较强，在色谱图中体现出的色谱峰的个数就会很多，但是这些杂质的含量并不高，按照ICH Q3A和Q3B指导原则，根据每日最大剂量，可以对方法设置报告限度，低于报告限度的杂质，不存在安全性的问题，可以不再进行报告。所以这些杂质不需要进行积分，但是因为有一些杂质在报告限度的附近，为避免误判的风险，可以设置相应的积分方式对报告限度水平一半的杂质不进行积分。这样既能保证积分的合理性和正确性，又能提高工作的效率。

       为保证不同的分析师可以采用相同的积分方式进行积分，需要在SOP中进行详细的说明，并对分析师进行严格的培训和考核。还需要在SOP中，对空白溶剂，辅料或者其他的我们非关注的峰，如果不进行积分，则应在SOP中明确。此外，如果单个方法中存在在特殊情况，一定要在方法中以高亮的方式体现，以确保每个分析师都可以清楚明了。

       现在实验室的工作都非常繁重，分析师的压力很大，在这种环境下还要进行细致入微的观察，很难没有疏漏，所以实验室应当建立合理的体系去协助分析师避免这种问题，要中试对电子数据的复核，而不是仅在办公位上对纸质的图进行核对。

4. 如何进行手动积分

       软件中的主要积分参数包括阈值，峰宽，最小峰面积和最小峰高。建议在建立积分方法的时候，尽量对这几个积分参数进行积分的调整，如果参与的积分参数过多，后面调整单个峰的难度就会越大，越容易出现积分不合理的情况。

       积分的方式分为自动积分和手动积分，通常一个序列应使用一个积分方法对整个序列进行批处理积分，如果自动积分的参数经过了一系列的调整，包括了高级的积分参数仍不能正确合理的对色谱图进行积分，则需要进行手动积分。手动积分一定要有SOP支持，并在手动积分之前，一定需要被相关部门批准，并在积分时详细的记录重新积分的原因，并保留自动积分的图谱做备用。

       产生手动积分的根本原因，可能还是在检测方法上，有可能是方法的基线波动，或者是分离度不是很好所导致，因此方法开发的时候，应当以分离度大于2.0为准，为日后的检测放行，以及稳定性检测等工作留有更多的可操作空间。

5.   总结

       上述内容主要针对有关物质的积分方式，但对于含量，残留溶剂等我们经常采用默认的积分参数，但如果把标尺放大到基线水平，你会惊奇的发现，积分的落点并不在色谱峰的尾巴上，因此除有关物质外，其他的检测方法在积分的时候也应当将标尺放大到基线水平观察积分的合理性。如果实验室对正确合理的积分进行足够的重视，既能增加实验室对自己检测结果的自信心，也能更加从容的面对每一次审计，这将是一劳永逸的事情，最后，期望本文对您能有所帮助。

      南京凯天化工公司主要从事医药中间体、原料药、金属有机化合物等的开发与销售，提供项目咨询、中试放大、工艺路线改进优化和指导生产等系列服务，我们已经与多家化工单位有合作业务，同时希望能与更多的研发机构、化工企事业单位进行多方面的合作。

色谱峰的积分正确与否关键在于操作是否规范，是否遵循了SOP的具体指导和是否得到了方法验证的支持。正确的积分需要确保积分参数设置得当，并且要批准手动调整积分时要详细记录调整原因。在实验室操作中，应严格按照操作规程执行，定期进行培训和考核，以提高数据的准确性和可靠性。在每次分析前后都要核对数据，确保符合质量控制标准。
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